光學(xué)顯微鏡對(duì)焦時(shí)的注意事項(xiàng)主要包括以下幾點(diǎn)：

初始對(duì)焦：

在初次使用顯微鏡時(shí)，需要先進(jìn)行初始對(duì)焦。這通常是通過粗調(diào)焦機(jī)構(gòu)將物鏡移動(dòng)到離標(biāo)本較遠(yuǎn)的位置，然后通過目鏡調(diào)焦機(jī)構(gòu)將孔徑調(diào)小。

接著，可以通過粗調(diào)焦機(jī)構(gòu)把物鏡逐漸移動(dòng)到與標(biāo)本的表面接觸，并繼續(xù)觀察目鏡中的圖像。若圖像尚未清晰，而且對(duì)焦機(jī)構(gòu)已經(jīng)到達(dá)極限，可以嘗試將標(biāo)本向上或向下移動(dòng)，直到圖像變得清晰銳利。

調(diào)整聚光：

聚光是控制樣品表面與物鏡之間距離的過程，也是控制樣品與暗場光源的距離。這個(gè)距離的改變直接影響著顯微鏡觀察的清晰度。

在調(diào)整聚光的過程中，需要逐漸減小孔徑，以增加深度聚焦的范圍。特別是在觀察比較厚的樣品時(shí)，需要通過調(diào)整聚光來改變光線的入射角度，從而獲得Z優(yōu)的對(duì)焦圖像。

微調(diào)對(duì)焦：

當(dāng)初次對(duì)焦完成后，需要進(jìn)行微調(diào)對(duì)焦以獲得更清晰的圖像。這主要通過物鏡調(diào)焦機(jī)構(gòu)來完成，需要慢慢地向前或向后旋轉(zhuǎn)物鏡調(diào)焦機(jī)構(gòu)，從而微調(diào)樣品與顯微鏡鏡頭的距離。

當(dāng)圖像變得更清晰時(shí)，可以通過適當(dāng)?shù)奈⒄{(diào)向前或向后移動(dòng)標(biāo)本，直到獲得Z佳的對(duì)焦結(jié)果。

避免振動(dòng)：

對(duì)焦過程中需要盡量保證顯微鏡穩(wěn)定，避免振動(dòng)影響圖像清晰度。

可以通過使用顯微鏡的多點(diǎn)支撐、放置在堅(jiān)實(shí)的桌子上、減小觀察時(shí)的呼吸頻率等措施來減少機(jī)械振動(dòng)。

注意物鏡和標(biāo)本的距離：

在調(diào)焦時(shí)，要注意物鏡和標(biāo)本之間的距離，避免物鏡直接接觸到標(biāo)本，以免損傷標(biāo)本或物鏡。

特別是在使用高倍物鏡時(shí)，要特別小心，因?yàn)榇藭r(shí)物鏡與標(biāo)本之間的距離非常近，稍有不慎就可能造成損傷。

選擇合適的調(diào)焦手輪：

在對(duì)焦過程中，應(yīng)根據(jù)需要選擇合適的調(diào)焦手輪。一般來說，粗調(diào)焦手輪用于快速調(diào)整焦距，而細(xì)調(diào)焦手輪則用于精確調(diào)整焦距。

在使用高倍物鏡時(shí)，應(yīng)避免使用粗調(diào)焦手輪，以免移動(dòng)距離過大而損傷物鏡和玻片。

觀察并調(diào)整圖像：

在對(duì)焦過程中，要密切觀察目鏡中的圖像變化，并根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。

如果圖像不清晰或存在其他問題，可以嘗試調(diào)整光源、光圈、反光鏡等部件，以獲得更好的觀察效果。

綜上所述，光學(xué)顯微鏡對(duì)焦時(shí)需要注意多個(gè)方面，包括初始對(duì)焦、調(diào)整聚光、微調(diào)對(duì)焦、避免振動(dòng)、注意物鏡和標(biāo)本的距離、選擇合適的調(diào)焦手輪以及觀察并調(diào)整圖像等。只有掌握了這些注意事項(xiàng)并正確操作顯微鏡，才能獲得清晰的圖像以及更加精確的觀測結(jié)果。