一、樣本制備：奠定**觀察的基礎(chǔ)

抗凝劑選擇與血樣處理

血液樣本需立即加入抗凝劑（如EDTA-K2或枸櫞酸鈉），避免凝血影響細(xì)胞形態(tài)。EDTA-K2適合血常規(guī)檢測，而枸櫞酸鈉用于凝血功能測試。血樣需在2小時內(nèi)完成涂片，防止細(xì)胞自溶或形態(tài)改變。

涂片制備技巧

推片法：將血滴置于載玻片一端，用另一載玻片以30°-45°角緩慢推勻，形成薄層血膜。紅細(xì)胞應(yīng)單層分布，白細(xì)胞密度控制在每高倍視野（400×）5-10個。

干燥控制：涂片后需自然晾干，避免高溫烘干導(dǎo)致細(xì)胞收縮或破裂。干燥不充分的樣本易出現(xiàn)紅細(xì)胞聚集，影響分類計數(shù)。

固定與染色策略

瑞氏-吉姆薩染色：將染色液與緩沖液按1:1混合，覆蓋涂片染色10-15分鐘。該染色法可清晰區(qū)分白細(xì)胞類型（如淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)差異）。

特殊染色：對于寄生蟲檢測（如瘧原蟲），需采用吉姆薩原液染色30分鐘，并結(jié)合暗場顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)病原體。

二、顯微鏡操作：從光源到成像的細(xì)節(jié)把控

光源與物鏡選擇

光源強度：初始觀察時采用低強度光源（約30%亮度），避免熒光淬滅或細(xì)胞結(jié)構(gòu)過曝。

物鏡匹配：低倍鏡（10×）用于全片掃描，高倍鏡（40×或100×油鏡）用于細(xì)胞形態(tài)分析。油鏡使用需確保浸油無氣泡，否則易導(dǎo)致圖像模糊。

觀察模式優(yōu)化

明場觀察：適用于紅細(xì)胞形態(tài)分析（如大小、色素、包涵體）及血小板估計。

暗場觀察：增強寄生蟲（如瘧原蟲環(huán)狀體）與背景的對比度，提升檢測靈敏度。

相差觀察：通過相位環(huán)調(diào)整，清晰呈現(xiàn)無色透明樣本（如未染色血涂片中的網(wǎng)織紅細(xì)胞）。

成像與數(shù)據(jù)記錄

對焦策略：先低倍鏡粗調(diào)對焦，再切換高倍鏡微調(diào)。油鏡使用前需確保物鏡前端與載玻片接觸，避免損壞鏡頭。

圖像采集：采用4K數(shù)碼成像系統(tǒng)，確保細(xì)胞結(jié)構(gòu)（如白細(xì)胞核分葉、血小板衛(wèi)星現(xiàn)象）清晰可辨。每例樣本至少采集5個視野，涵蓋不同區(qū)域。

三、常見問題與解決方案

樣本干燥與染色不均

原因：涂片過厚或染色時間不足。

解決：重新制備薄層涂片，延長染色時間至15分鐘，并確保染色液均勻覆蓋。

細(xì)胞識別困難

紅細(xì)胞：注意大小、色素（如低色素紅細(xì)胞）、形態(tài)（如球形紅細(xì)胞）及包涵體（如豪焦小體）。

白細(xì)胞：結(jié)合細(xì)胞大小、核質(zhì)比、顆粒類型（如中性粒細(xì)胞的中性顆粒）進(jìn)行分類。

血小板：估計血小板數(shù)量時，需在油鏡下計數(shù)10個視野，取平均值。

寄生蟲漏檢

瘧原蟲檢測：采用厚薄血膜聯(lián)合染色法，厚血膜提高檢出率，薄血膜確認(rèn)蟲種。

微絲蚴檢測：需在夜間采集血樣，結(jié)合低倍鏡慢速掃描（掃描速度≤5mm/s）。

四、安全與維護(hù)：確保設(shè)備與樣本安全

生物安全處理

廢棄血涂片需浸泡于84消毒液中30分鐘，再按醫(yī)療廢物處理。

操作過程中佩戴手套，避免直接接觸樣本，防止血源性病原體傳播。

顯微鏡日常維護(hù)

物鏡清潔：使用專用擦鏡紙與乙醚-酒精混合液（7:3）擦拭，避免劃傷鏡片。

載物臺校準(zhǔn)：定期使用標(biāo)準(zhǔn)尺校驗載物臺移動精度，確保掃描區(qū)域準(zhǔn)確性。

通過樣本制備、顯微鏡操作、問題解決及安全維護(hù)的規(guī)范化流程，光學(xué)顯微鏡在血液觀察中可實現(xiàn)從形態(tài)學(xué)篩查到定量分析的全面應(yīng)用。這種系統(tǒng)化操作不僅提升了診斷效率與準(zhǔn)確性，更為血液病研究、寄生蟲檢測等領(lǐng)域提供了可靠的技術(shù)支持。